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菊粉酶的純化

菊粉酶的純化步驟一般分為：（NH4）2SO4沉淀、離子交換層析及凝膠過濾色譜等。離子交換層析可用來選擇性地分離外切型菊粉酶和內(nèi)切型菊粉酶，通常用NaCI進行線性梯度洗脫，隨著Na－CI濃度增加，內(nèi)切菊粉酶先洗出，外切酶后洗出（Azhall等，1989）。菊粉酶的提純過程：在0 ℃條件下，用40％飽和硫酸銨除雜蛋白，用90％飽和硫酸鉸析出菊粉酶，用 Sephadex G25脫鹽，聚乙二醇透析濃縮；再進行Sophadex G200層析，操作溫度10℃；然后進行DEAE一纖維素DE52離子交換層析；最后4℃、120V恒壓電泳分離（賈英民等，1998）。